本標(biāo)準(zhǔn)的范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了非洲豬瘟的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷方法；臨床診斷依據(jù)臨床癥狀和病理變化，可初步判定為疑似非洲豬瘟病例，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，對(duì)病例作出是否為非洲豬瘟的診斷。本標(biāo)準(zhǔn)適用于家豬和野豬的診斷與監(jiān)測(cè)，并不適用于人、其他動(dòng)物、植物以及飼料等。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法和商品化試劑

1、國(guó)標(biāo)“方法”是根據(jù)基礎(chǔ)技術(shù)和理論進(jìn)行比較，規(guī)定不同方法的檢測(cè)結(jié)果之間的判定優(yōu)先權(quán)，與商品化試劑、儀器設(shè)備、工具、人員無(wú)關(guān)。方法用于“檢測(cè)”，對(duì)臨床病例的“確診”需要綜合判定。

2、CNAS認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室根據(jù)“檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則(ISO/IEC 17025:2017)”進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)使用“國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)”發(fā)布的方法。

3、采用國(guó)標(biāo)方法開(kāi)發(fā)生產(chǎn)的商品化試劑，可稱(chēng)為國(guó)標(biāo)試劑；采用非國(guó)標(biāo)方法或者原理開(kāi)發(fā)生產(chǎn)的商品化試劑，可稱(chēng)為非標(biāo)試劑。

本標(biāo)準(zhǔn)中方法的分類(lèi)

本標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的用于非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室診斷的“方法”，從檢測(cè)靶標(biāo)物質(zhì)的分子水平上，可以分為三大類(lèi)，即核酸檢測(cè)方法、病毒（完整顆粒）檢測(cè)方法和抗體檢測(cè)方法。

考慮到生物安全和相關(guān)政策要求，本標(biāo)準(zhǔn)不支持病毒分離、培養(yǎng)和鑒定等基礎(chǔ)病毒學(xué)操作技術(shù)作為非洲豬瘟的診斷方法，亦未提供ASFV是否為活病毒、是否具有感染力的檢測(cè)方法。目前符合相關(guān)政策要求和生物安全要求，同時(shí)能夠滿(mǎn)足復(fù)養(yǎng)復(fù)產(chǎn)需要的方法是投放“哨兵動(dòng)物”，相當(dāng)于病毒學(xué)中的動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)環(huán)境中是否存在具有感染力的活的非洲豬瘟病毒顆粒。

普通PCR方法、熒光PCR方法和熒光RAA方法，檢測(cè)靶標(biāo)非洲豬瘟病毒的遺傳物質(zhì)即脫氧核糖核酸（DNA）的一段序列，可簡(jiǎn)稱(chēng)為核酸檢測(cè)（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)7、8、9）。

本標(biāo)準(zhǔn)中核酸檢測(cè)方法的檢測(cè)靶標(biāo)均為ASFV編碼P72蛋白基因即B646L，且均給出了引物、探針等序列，擴(kuò)增片段位置和長(zhǎng)度各不相同，見(jiàn)圖1。

那么以檢測(cè)ASFV其它基因序列為靶標(biāo)的商品化試劑均為非標(biāo)試劑。

高敏熒光免疫分析法和夾心ELISA抗原檢測(cè)法，檢測(cè)靶標(biāo)為完整的病毒顆粒，見(jiàn)圖2，可簡(jiǎn)稱(chēng)為病毒（完整顆粒）檢測(cè)（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)10、11）。

間接ELISA抗體檢測(cè)方法、阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法、夾心ELISA抗體檢測(cè)方法和間接免疫熒光法，檢測(cè)靶標(biāo)為豬感染（或免疫）病毒后體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體，可簡(jiǎn)稱(chēng)為抗體檢測(cè)。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的抗體檢測(cè)方法又可分為全病毒特異性抗體檢測(cè)方法（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)15，感染ASFV的細(xì)胞）和病毒單一結(jié)構(gòu)蛋白特異性抗體檢測(cè)方法（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)12、13、14和15感染重組病毒（表達(dá)ASFV蛋白）。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體為P54、P30特異性抗體。

本標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)結(jié)果判定的等效性和優(yōu)先權(quán)

核酸、病毒（完整顆粒）和抗體三大類(lèi)方法均可用于實(shí)驗(yàn)室診斷，使ASFV的檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)更具有適用性，不同層級(jí)的實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際條件、檢測(cè)需求和目的進(jìn)行選擇，同時(shí)在綜合判定（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)16）中也依據(jù)不同檢測(cè)方法的最低檢出限規(guī)定了不同方法檢測(cè)結(jié)果之間的判定優(yōu)先權(quán)和終審權(quán)。

核酸和病毒（完整顆粒）檢測(cè)方法均為陽(yáng)性具有等效性：核酸檢測(cè)方法（普通PCR方法、熒光PCR方法、熒光RAA方法）和病毒檢測(cè)方法（高敏熒光免疫分析法、夾心ELISA抗原檢測(cè)方法），任何一種方法檢測(cè)陽(yáng)性的，可診斷為ASF病例。

核酸和病毒（完整顆粒）檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果不同時(shí)的判定優(yōu)先權(quán)：當(dāng)檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)，普通PCR方法、高敏熒光免疫分析法和夾心ELISA抗原檢測(cè)法的任何一種的檢測(cè)陰性結(jié)果，必須服從于熒光PCR方法或熒光RAA方法任何一種陽(yáng)性結(jié)果，可診斷為非洲豬瘟病毒感染。

本項(xiàng)規(guī)定，主要是依據(jù)不同方法的檢測(cè)靈敏度確定，見(jiàn)圖3、4、5。

核酸、病毒（完整顆粒）和抗體三大類(lèi)方法均可用于實(shí)驗(yàn)室診斷，使ASFV的檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)更具有適用性，不同層級(jí)的實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際條件、檢測(cè)需求和目的進(jìn)行選擇，同時(shí)在綜合判定（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)16）中也依據(jù)不同檢測(cè)方法的最低檢出限規(guī)定了不同方法檢測(cè)結(jié)果之間的判定優(yōu)先權(quán)和終審權(quán)。